GPR39 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410802-ACT

ヒトGPR39は、細胞外のZn2+利用可能性を細胞内シグナル伝達と統合し、細胞の興奮性、分泌、および生存プログラムを調節する亜鉛感知型Gタンパク質共役受容体（GPCR）をコードしています。活性化されると、GPR39はGq/11およびGs関連経路に共役し、ホスホリパーゼC依存性のカルシウムシグナルやcAMP/PKAカスケードを促進し、これらはMAPK/ERK経路や転写応答と交差します。こうしたシグナル出力は、上皮および代謝の恒常性、炎症シグナル、神経機能の調節と関連づけられており、GPR39はGPCR駆動性経路ダイナミクスを研究するうえで有用なノードとなります。文献では、GPR39の発現やシグナルの変化が、心代謝系の表現型、消化管バリア機能、神経行動学的エンドポイントと関連することが報告されており、細胞ベースの系における機序的疾患モデリングに対する関連性が支持されています。

GPR39 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPR39の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPR39 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPR39 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPR39転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPR39の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPR39遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPR39依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPR39発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPR39経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。