golgin 160 Plasmide Double Nickase (h): sc-403862-NIC

GOLGA3 codifica la golgina 160, una golgina a coiled-coil localizzata nell’apparato di Golgi che contribuisce a organizzare l’architettura del Golgi e supporta l’ancoraggio e il traffico delle vescicole tra compartimenti endomembranosi. Come parte della via secretoria, la golgina 160 contribuisce allo smistamento del carico e al mantenimento dell’integrità del “Golgi ribbon”, influenzando la maturazione delle proteine e la loro consegna alle destinazioni a valle. L’alterazione dei programmi di ancoraggio e traffico del Golgi è associata a risposte di stress cellulare, segnalazione modificata e cambiamenti nella polarità e nella migrazione cellulare, rendendo GOLGA3 un bersaglio rilevante per studiare i meccanismi che collegano l’organizzazione degli organelli a fenotipi associati a malattia. Nella ricerca biomedica, la funzione della golgina 160 viene spesso esaminata nel contesto delle dinamiche di membrana, della regolazione della via secretoria e delle perturbazioni della proteostasi dipendente dal Golgi.

golgin 160 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GOLGA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GOLGA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GOLGA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GOLGA3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.