Plásmido CRISPR de Activación (m) GKLF/KLF4: sc-421298-ACT

El Klf4 de ratón (GKLF/KLF4) codifica un factor de transcripción con dedos de zinc que regula la diferenciación epitelial, el control del ciclo celular y el mantenimiento de la identidad celular mediante la coordinación de programas transcripcionales específicos de linaje. KLF4 modula vías vinculadas a la “stemness” y la reprogramación, incluida su integración con WNT/β-catenina, TGF-β/SMAD y respuestas al estrés dependientes de p53, e influye en la función de barrera y la señalización inflamatoria en tejidos epiteliales. Según el contexto celular, la alteración de la expresión de Klf4 perturba el equilibrio entre proliferación y diferenciación y puede contribuir a una homeostasis tisular desregulada relevante para la transformación oncogénica, la fibrosis y los fenotipos de reparación de heridas. En modelos de ratón, Klf4 se utiliza ampliamente para estudiar la reprogramación de células somáticas, la biología epitelial y las redes transcripcionales que gobiernan la pluripotencia y la diferenciación.

GKLF/KLF4 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Klf4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GKLF/KLF4 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Klf4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Klf4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GKLF/KLF4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Klf4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GKLF/KLF4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GKLF/KLF4 en células tumorales con expresión de Klf4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.