GFAP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400130-ACT

A proteína ácida fibrilar glial (GFAP) é uma proteína de filamento intermediário que define a identidade dos astrócitos e contribui para a organização do citoesqueleto, a estabilidade mecânica celular e a remodelação dos prolongamentos no sistema nervoso central. A dinâmica da GFAP cruza-se com programas de reatividade dos astrócitos e com redes de sinalização como JAK/STAT e MAPK, que modulam a gliose, a neuroinflamação e as respostas de reparo tecidual. Alterações na expressão da GFAP e na arquitetura dos filamentos estão associadas à disfunção dos astrócitos em condições neurológicas e neurodegenerativas, e a GFAP é amplamente utilizada como leitura molecular do estado de ativação e da linhagem dos astrócitos. A modulação experimental da GFAP sustenta estudos sobre a maturação de astrócitos, as interações neurônio–glia e a remodelação do citoesqueleto responsiva ao estresse.

GFAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GFAP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GFAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GFAP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GFAP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GFAP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GFAP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GFAP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GFAP em células tumorais com expressão de GFAP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.