GCP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404751

概要

TUBGCP2 は、γ-チューブリン複合体タンパク質2（GCP2）をコードしており、中心体やその他の微小管形成中心（MTOC）で微小管の核形成を担う γ-チューブリン環状複合体（γTuRC）の中核構成要素です。GCP2 は、有糸分裂紡錘体の組み立て、中心体の成熟、微小管の極性維持を支えることで、細胞周期の進行や染色体分配に影響します。中心体および紡錘体の完全性に関与することから、TUBGCP2 機能の変化は、ゲノム不安定性や増殖性表現型に関連する経路との関係が示唆されます。γTuRC 構成要素の破綻は、中心体異常、異数性、ならびに複数の疾患関連細胞状態で観察される細胞骨格欠陥との関連で、しばしば研究対象となります。

GCP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTUBGCP2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TUBGCP2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TUBGCP2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GCP2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GCP2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TUBGCP2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GCP2の機能に不可欠なTUBGCP2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TUBGCP2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GCP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGCP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TUBGCP2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GCP2 HDRプラスミド（h）および GCP2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTUBGCP2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTUBGCP2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。