Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GCN2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402313-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GCN2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GCN2 Double-Nickase-Plasmid (h) und GCN2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EIF2AK4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GCN2: sc-374609
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GCN2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402313-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GCN2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402313-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **EIF2AK4** kodiert **GCN2**, eine Serin/Threonin-Kinase, die eine Aminosäurelimitierung über die Bindung unbeladener tRNAs erkennt und **eIF2α** phosphoryliert, um die integrierte Stressantwort (ISR) zu initiieren. Dieses Signal senkt die globale Translation, fördert jedoch die selektive Translation stressadaptiver Transkripte und koppelt so die Nährstoffverfügbarkeit an Proteostase, Autophagie und metabolische Umprogrammierung. GCN2 integriert Signale aus Aminosäureentzug und anderen zellulären Stressoren, um ATF4-abhängige Transkriptionsprogramme zu modulieren und mit mTORC1- sowie inflammatorischen Signalwegen zu interagieren. Eine dysregulierte EIF2AK4/GCN2-Aktivität wurde in der Literatur mit veränderter Stresstoleranz, Immunzellfunktion und metabolischem Ungleichgewicht in Verbindung gebracht und ist damit ein relevanter Knotenpunkt für mechanistische Studien zu Stressadaptationswegen.
GCN2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EIF2AK4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EIF2AK4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EIF2AK4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EIF2AK4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.