GalNAc-T2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430824

Visão geral

Galnt2 codifica, no camundongo, a polipeptídeo N-acetilgalactosaminiltransferase GalNAc-T2, uma enzima residente no Golgi que inicia a glicosilação O‑ligada do tipo mucina ao transferir GalNAc para resíduos de serina/treonina em proteínas secretadas e de membrana. Ao moldar a composição e a densidade dos O‑glicanos, a GalNAc-T2 influencia o dobramento proteico, a suscetibilidade a proteases, as interações receptor–ligante e a organização da matriz extracelular. Esse programa de glicosilação se integra ao controle de qualidade da via secretora e pode modular a sinalização e a comunicação célula–célula por meio de alterações no tráfego de glicoproteínas e em sua apresentação na superfície. A glicosilação O desregulada é amplamente implicada em inflamação, fenótipos metabólicos e remodelamento de glicanos associado a tumores, tornando Galnt2 um nó útil para estudar alterações no glicoproteoma relevantes para mecanismos de doença.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GalNAc-T2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Galnt2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Galnt2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Galnt2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GalNAc-T2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Galnt2 para a investigação da sinalização de GalNAc-T2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Galnt2 críticos para a função GalNAc-T2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Galnt2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GalNAc-T2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo GalNAc-T2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Galnt2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GalNAc-T2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR GalNAc-T2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Galnt2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Galnt2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.