Plasmide Double Nickase (h) Gα i-1/GNAI1: sc-400652-NIC

GNAI1 code la sous-unité alpha inhibitrice des protéines G, Gαi-1, un composant central des protéines G hétérotrimériques qui transmettent les signaux des GPCR vers des effecteurs en aval. Lors de l’activation du récepteur, Gαi-1 inhibe l’activité de l’adénylate cyclase afin de réduire les niveaux d’AMPc, et module la fonction des canaux ioniques ainsi que la signalisation des kinases — notamment des nœuds des voies PI3K/AKT et MAPK — via les sorties à la fois de Gα et de Gβγ. Ces programmes de signalisation régulent la prolifération, la différenciation, la sécrétion et la migration chimiotactique dans de nombreux types cellulaires. Un couplage GPCR–protéine G dérégulé et une signalisation dépendante de l’AMPc altérée ont été impliqués dans la reconfiguration de la signalisation associée au cancer, les réponses inflammatoires et des phénotypes neurologiques, faisant de GNAI1 une cible utile pour la dissection des voies de signalisation.

Gα i-1/GNAI1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GNAI1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GNAI1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GNAI1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GNAI1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.