Gα i-1/GNAI1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400652-NIC

GNAI1 codifica la subunità alfa inibitoria della proteina G, Gαi-1, un componente chiave delle proteine G eterotrimeriche che trasducono i segnali dai GPCR agli effettori a valle. In seguito all’attivazione del recettore, Gαi-1 sopprime l’attività dell’adenilato ciclasi riducendo i livelli di cAMP e modula la funzione dei canali ionici e la segnalazione delle chinasi, inclusi nodi delle vie PI3K/AKT e MAPK, attraverso output sia di Gα sia di Gβγ. Questi programmi di segnalazione regolano proliferazione, differenziamento, secrezione e migrazione chemiotattica in molti tipi cellulari. Un accoppiamento GPCR–proteina G deregolato e una segnalazione dipendente dal cAMP alterata sono stati implicati nel rimodellamento dei circuiti di segnalazione associato al cancro, nelle risposte infiammatorie e in fenotipi neurologici, rendendo GNAI1 un bersaglio utile per l’analisi delle vie di segnalazione.

Gα i-1/GNAI1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GNAI1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GNAI1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GNAI1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GNAI1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.