Plásmido Doble Nickase (h) FXR/NR1H4: sc-417410-NIC

NR1H4 codifica el receptor X farnesoide (FXR), un receptor nuclear activado por ácidos biliares que actúa como factor de transcripción dependiente de ligando y controla la síntesis, el transporte y la detoxificación de los ácidos biliares. En hepatocitos y enterocitos, FXR coordina programas metabólicos e inflamatorios a través de vías que incluyen la regulación FXR–SHP de CYP7A1, la inducción de transportadores de exportación y captación de sales biliares, y la interacción con la señalización de FGF19/FGF15. Al integrar la homeostasis de los ácidos biliares con el metabolismo de lípidos y glucosa, FXR influye en las respuestas de estrés celular, la función de barrera y la modulación inmunitaria en el eje intestino–hígado. La desregulación de la señalización de FXR se asocia con fenotipos hepáticos colestásicos y metabólicos, y se estudia en contextos como la esteatohepatitis, la progresión de la fibrosis y la biología tumoral hepatobiliar.

FXR/NR1H4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NR1H4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NR1H4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NR1H4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NR1H4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.