Plásmido CRISPR de Activación (h) FOXC2: sc-402351-ACT

FOXC2 (forkhead box C2) es un factor de transcripción humano de la familia forkhead que programa la identidad de las células mesenquimales y endoteliales durante el desarrollo y en la homeostasis de los tejidos adultos. Regula redes génicas implicadas en la linfangiogénesis, la remodelación vascular, la transición epitelio-mesenquimal, la organización de la matriz extracelular y la dinámica del citoesqueleto, interactuando con ejes de señalización como TGF-β, Notch y vías dependientes de VEGF. La actividad de FOXC2 influye en la migración celular y la capacidad invasiva mediante el control transcripcional de genes de adhesión y motilidad, y la alteración de su expresión se ha asociado con la progresión metastásica en múltiples contextos tumorales. La alteración germinal de FOXC2 se vincula al síndrome de linfedema–distiquiasis, lo que subraya su papel en la formación de las válvulas linfáticas y en la función del sistema linfático.

FOXC2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FOXC2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FOXC2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FOXC2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FOXC2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FOXC2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FOXC2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FOXC2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FOXC2 en células tumorales con expresión de FOXC2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.