Plasmide Double Nickase (m) Flotillin-1: sc-420381-NIC

Flot1 code la flotilline‑1, une protéine d’échafaudage associée aux radeaux lipidiques, enrichie à la membrane plasmique et dans les compartiments endosomaux, où elle organise des microdomaines membranaires. La flotilline‑1 participe à l’endocytose indépendante de la clathrine, au trafic vésiculaire et à la transduction du signal en coordonnant l’agrégation des récepteurs et les interactions avec le cytosquelette, influençant des voies telles que EGFR/MAPK et PI3K/AKT. Dans les cellules de souris, Flot1 contribue à la signalisation immunitaire, à l’organisation membranaire des neurones et des cellules gliales, ainsi qu’à la régulation de l’adhérence et de la migration cellulaires via un tri des protéines dépendant des radeaux. Des altérations de l’abondance ou de la localisation de la flotilline‑1 ont été associées à des dérégulations du trafic membranaire et de la signalisation, avec des phénotypes pertinents pour des processus oncogéniques, la neurobiologie et des modèles de maladies inflammatoires.

Flotillin-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Flot1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Flot1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Flot1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Flot1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.