Plasmide Double Nickase (h) Fli-1: sc-400494-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Fli-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Fli-1 Double Nickase (h) et le plasmide Fli-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FLI1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Fli-1 Antibody (F-12): sc-365294
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Fli-1 | sc-400494-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Fli-1 | sc-400494-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FLI1 code pour Fli-1, un facteur de transcription de la famille ETS qui se lie à des éléments régulateurs contenant le motif GGAA afin de contrôler des programmes géniques impliqués dans la différenciation hématopoïétique, la mégacaryopoïèse et la fonction des cellules endothéliales. Fli-1 intègre des signaux de signalisation avec la régulation de la chromatine pour moduler des réseaux transcriptionnels gouvernant la prolifération, l’engagement de lignée et l’homéostasie vasculaire. Une activité dérégulée de FLI1 a été impliquée dans une reprogrammation transcriptionnelle oncogénique ainsi que dans des phénotypes immunitaires et vasculaires aberrants, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude de voies pilotées par des facteurs de transcription dans les cellules humaines. De plus, FLI1 est souvent étudié dans le contexte de la biologie des fusions géniques et des paysages d’activateurs (enhancers) spécifiques de lignée qui façonnent l’identité cellulaire.
Fli-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FLI1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FLI1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FLI1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FLI1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.