Plásmido CRISPR de Activación (h) FKBP8: sc-403075-ACT

FKBP8 (proteína de unión a FK506 8), también conocida como FKBP38, es una inmunofilina asociada a mitocondrias y al retículo endoplásmico (RE) que actúa como isomerasa peptidil-prolil cis–trans y como factor de andamiaje que coordina el plegamiento de proteínas y la señalización. En células humanas, FKBP8 modula la apoptosis y la homeostasis mitocondrial mediante interacciones con proteínas de la familia BCL2 y participa en vías de proteostasis, incluidas redes de chaperonas y el recambio selectivo de proteínas. Se ha relacionado con la regulación de la señalización de mTOR y con respuestas de estrés celular que influyen en decisiones de supervivencia bajo estrés metabólico o proteotóxico. La expresión o función desregulada de FKBP8 se ha estudiado en contextos que implican un control anómalo de la apoptosis, disfunción mitocondrial y señalización adaptativa al estrés alterada, relevantes para la biología del cáncer y la investigación en neurodegeneración.

FKBP8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FKBP8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FKBP8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FKBP8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FKBP8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FKBP8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FKBP8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FKBP8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FKBP8 en células tumorales con expresión de FKBP8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.