Filaggrin 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406347-ACT

FLG2 codifica a filagrina 2, uma proteína de diferenciação epidérmica que contribui para a organização dos filamentos intermediários de queratina e para a maturação tardia do envelope cornificado durante a diferenciação terminal dos queratinócitos. A filagrina 2 sustenta a estrutura do estrato córneo, a homeostase da barreira e processos relacionados à descamação que influenciam a hidratação e a resiliência mecânica da pele. Alterações na expressão ou na regulação de FLG2 têm sido associadas à disfunção da barreira epidérmica e a fenótipos inflamatórios cutâneos, incluindo dermatite atópica e apresentações semelhantes à ictiose. Como um marcador (readout) de programas de diferenciação, FLG2 é comumente estudado em conjunto com vias de queratinização, cornificação e resposta ao estresse na biologia epitelial.

Filaggrin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FLG2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Filaggrin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FLG2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FLG2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Filaggrin 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FLG2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Filaggrin 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Filaggrin 2 em células tumorais com expressão de FLG2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.