Fibulin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401754-ACT

FBLN1 codifica a fibulina-1, uma glicoproteína secretada da matriz extracelular que se associa a fibras elásticas e a componentes da membrana basal para regular a montagem da matriz, a adesão celular e a remodelação tecidual. A fibulina-1 interage com integrinas e outras proteínas da MEC para influenciar a organização do citoesqueleto, a migração celular e a disponibilidade de fatores de crescimento, relacionando-a à sinalização matriz extracelular–receptor e à mecanotransdução. Alterações na expressão de FBLN1 e na deposição de fibulina-1 foram observadas em contextos de remodelação vascular, fibrose e alterações estromais associadas a tumores, tornando-a relevante para estudos de fenótipos impulsionados pelo microambiente. Em modelos celulares humanos, FBLN1 é frequentemente analisado por suas contribuições para interações epitélio–mesênquima, função endotelial e regulação da proliferação e da motilidade dependente da matriz.

Fibulin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FBLN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Fibulin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FBLN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FBLN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Fibulin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FBLN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Fibulin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Fibulin-1 em células tumorais com expressão de FBLN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.