Plásmido Doble Nickase (h) Fibrinogen α: sc-400793-NIC

FGA codifica la fibrinógeno α, una de las tres cadenas polipeptídicas que se ensamblan para formar el hexámero de fibrinógeno (AαBβγ), sintetizado principalmente por los hepatocitos y secretado al plasma. Tras una lesión vascular, la trombina escinde el fibrinógeno para generar monómeros de fibrina que polimerizan y se estabilizan mediante el entrecruzamiento mediado por el factor XIII, formando el armazón estructural de los coágulos sanguíneos. La fibrinógeno α también contribuye a la agregación plaquetaria y a las interacciones célula–matriz mediante la unión a integrinas, y puede influir en la señalización inflamatoria dentro de la cascada de coagulación. Las alteraciones en la secuencia o la expresión de FGA se asocian con disfibrinogenemia y fenotipos hemorrágicos o trombóticos, por lo que es relevante para estudios de hemostasia, remodelación de la matriz extracelular y biología vascular.

Fibrinogen α El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FGA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FGA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FGA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FGA alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.