Plasmide Double Nickase (h) Fibrinogen α: sc-400793-NIC

FGA code pour la chaîne α du fibrinogène, l’une des trois chaînes polypeptidiques qui s’assemblent en hexamère de fibrinogène (AαBβγ), principalement synthétisé par les hépatocytes puis sécrété dans le plasma. Lors d’une lésion vasculaire, la thrombine clive le fibrinogène pour générer des monomères de fibrine qui polymérisent et sont stabilisés par un réticulage médié par le facteur XIII, formant l’armature structurale des caillots sanguins. La chaîne α du fibrinogène contribue également à l’agrégation plaquettaire et aux interactions cellule–matrice via la liaison aux intégrines, et peut moduler la signalisation inflammatoire au sein de la cascade de coagulation. Des altérations de la séquence ou de l’expression de FGA sont associées à la dysfibrinogénémie et à des phénotypes hémorragiques ou thrombotiques, ce qui en fait une cible pertinente pour les études de l’hémostase, du remodelage de la matrice extracellulaire et de la biologie vasculaire.

Fibrinogen α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FGA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FGA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FGA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FGA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.