FGF-4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403042-NIC

FGF4 は、分泌型のヘパリン結合性リガンドである線維芽細胞増殖因子4（FGF-4）をコードしており、主に FGFR ファミリーの受容体型チロシンキナーゼを介してシグナルを伝達し、胚のパターニング、四肢形成、組織形態形成を制御します。FGF-4 が受容体に結合すると、下流の RAS–MAPK/ERK、PI3K–AKT、PLCγ の各シグナル伝達カスケードが活性化され、応答する細胞種における増殖、生存、遊走、分化が協調的に制御されます。FGF4 シグナルの破綻は、異常な増殖制御や発生プログラムの改変に関与するとされ、がん関連経路の活性化、幹／前駆細胞の挙動、腫瘍—間質コミュニケーションの研究において重要です。より広い FGF–FGFR 軸の一部として、FGF-4 は上皮—間葉動態や微小環境シグナル伝達への影響という観点からもしばしば検討されます。

FGF-4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FGF4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FGF4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FGF4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FGF4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。