ferritin light chain Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400924

Descripción general

FTL codifica la cadena ligera de la ferritina, un componente central del heteropolímero de ferritina que secuestra y mineraliza el hierro para mantener la homeostasis del hierro celular y limitar el estrés oxidativo impulsado por el hierro. Al amortiguar los reservorios de hierro lábil, FTL influye en el equilibrio redox, la función mitocondrial y la señalización sensible al hierro a través de la red reguladora IRP/IRE, coordinando el almacenamiento de hierro con su captación y utilización. La alteración de la composición o la expresión de la ferritina puede modificar la sensibilidad a la ferroptosis y las respuestas al estrés inflamatorio al cambiar la disponibilidad de hierro y la propensión a la peroxidación lipídica. La desregulación de FTL y de la biología de la ferritina se ha vinculado con la neurodegeneración, la mala gestión del hierro asociada a la anemia y la reprogramación metabólica relacionada con el cáncer, lo que convierte a FTL en un nodo útil para estudiar fenotipos celulares dependientes del hierro.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ferritin light chain (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FTL en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FTL junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FTL tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ferritin light chain.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FTL para la investigación de la señalización de ferritin light chain, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FTL críticos para la función de ferritin light chain
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FTL para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ferritin light chain CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ferritin light chain CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FTL. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ferritin light chain (h) y el plásmido HDR ferritin light chain (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FTL para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FTL definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.