FBXW5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404410-ACT

FBXW5は、ユビキチン依存的なプロテアソーム分解における標的特異性を担うSCF（SKP1–CUL1–F-box）E3ユビキチンリガーゼ複合体の構成要素である、F-box／WDリピート含有基質受容体をコードします。シグナル伝達および細胞周期関連タンパク質の制御されたターンオーバーを介して、FBXW5はプロテオスタシスの維持、チェックポイントの協調、ならびに増殖やストレス応答に関わる経路の調節に寄与します。F-boxタンパク質が関与するユビキチン–プロテアソーム系の活性変化は、しばしば増殖制御の破綻やゲノム安定性の異常と結び付くため、FBXW5はがん生物学および関連する細胞表現型の機構研究において重要な結節点となります。ヒト遺伝子としてのFBXW5は、特定の細胞コンテキストにおいて基質認識や分解速度（キネティクス）が経路出力をどのように作り替えるか、という観点から一般に研究されています。

FBXW5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FBXW5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FBXW5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FBXW5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFBXW5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FBXW5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFBXW5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFBXW5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFBXW5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFBXW5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。