FAM177A1 CRISPR Activation Plasmid (h2): sc-417161-ACT-2

Das humane FAM177A1 (family with sequence similarity 177 member A1) kodiert ein nur unzureichend charakterisiertes Protein, für das sich auf Basis von Expressions- und genetischen Assoziationsdaten zunehmend Hinweise auf eine Rolle in der zellulären Homöostase und in immunbezogenen biologischen Prozessen ergeben. Die derzeitige Evidenz deutet darauf hin, dass FAM177A1 den intrazellulären Transport und Signalprogramme beeinflussen könnte, die Entzündungsreaktionen prägen, was das Gen für die Untersuchung kontextabhängiger Regulation angeborener Immunwege relevant macht. Varianten oder veränderte Expression von FAM177A1 wurden mit komplexen Krankheitsphänotypen in Verbindung gebracht, was seine Eignung als Ziel in der funktionellen Genomik zur Analyse von Gen-Umwelt-Interaktionen und nachgeschalteten Transkriptionsnetzwerken unterstreicht. Das Gene Editing von FAM177A1 in menschlichen Zellen ermöglicht mechanistische Studien zur Vernetzung von Signalwegen, phänotypisches Screening sowie die Validierung kandidativer regulatorischer Elemente, die Immun- und Stressantwortprozesse beeinflussen.

FAM177A1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FAM177A1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FAM177A1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FAM177A1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FAM177A1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FAM177A1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FAM177A1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FAM177A1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FAM177A1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FAM177A1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.