ERRβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424021

Panoramica

Il recettore beta correlato agli estrogeni (ERRβ), codificato nel topo da Esrrb, è un recettore nucleare orfano che funge da fattore di trascrizione, coordinando programmi genici coinvolti nel metabolismo energetico, nella funzione mitocondriale e nelle decisioni di destino cellulare. Nelle cellule pluripotenti, Esrrb contribuisce al mantenimento dell’autorinnovamento e si integra con le reti trascrizionali core che regolano la differenziazione e l’impegno di linea. L’attività di ERRβ è collegata alla segnalazione dei recettori degli ormoni steroidei e a un più ampio controllo trascrizionale delle vie ossidative e dello sviluppo. La disregolazione della trascrizione dipendente da Esrrb è stata associata ad esiti di sviluppo alterati e a cambiamenti dipendenti dal contesto nella proliferazione cellulare e nello stato metabolico, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico in modelli rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ERRβ (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Esrrb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Esrrb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Esrrb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ERRβ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Esrrb per lo studio della segnalazione di ERRβ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Esrrb critici per la funzione di ERRβ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Esrrb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ERRβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ERRβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Esrrb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ERRβ Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ERRβ (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Esrrb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Esrrb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.