ERp57 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420698

Descripción general

Pdia3 codifica ERp57 (también conocida como PDIA3/GRP58), una oxidorreductasa tiol–disulfuro del retículo endoplásmico que se asocia con calnexina y calreticulina para favorecer el plegamiento oxidativo y el control de calidad de glicoproteínas nacientes. ERp57 contribuye a la proteostasis del RE mediante la formación de enlaces disulfuro y está estrechamente vinculada a la señalización de la respuesta a proteínas desplegadas (UPR), la degradación asociada al RE (ERAD) y la homeostasis redox. Más allá de la luz del RE, se ha implicado a PDIA3 en la presentación de antígenos mediante la carga de péptidos en el MHC de clase I y en la modulación de vías de señalización relacionadas con la adaptación celular al estrés. La desregulación de la actividad de PDIA3/ERp57 se asocia con afecciones caracterizadas por estrés proteotóxico y oxidativo, incluidos modelos de enfermedades neurodegenerativas y metabólicas, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos del estrés del RE y de procesos relacionados con el sistema inmunitario.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ERp57 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pdia3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pdia3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pdia3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ERp57.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pdia3 para la investigación de la señalización de ERp57, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pdia3 críticos para la función de ERp57
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pdia3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ERp57 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ERp57 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pdia3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ERp57 (m) y el plásmido HDR ERp57 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pdia3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pdia3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.