Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ERCC1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400630-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ERCC1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ERCC1 Double-Nickase-Plasmid (h) und ERCC1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ERCC1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ERCC1: sc-17809
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ERCC1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400630-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ERCC1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400630-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERCC1 kodiert eine strukturspezifische Endonuklease, die mit XPF (ERCC4) ein Heterodimer bildet, um während der Nukleotid-Exzisionsreparatur den 5′-Schnitt auszuführen sowie DNA-Interstrangvernetzungen und blockierte Replikationszwischenprodukte zu verarbeiten. Dieser Komplex wirkt in Mechanismen der Genomstabilität, die helixverzerrende Läsionen beheben und Reparatur mit der Replikation koordinieren, wodurch die Anhäufung von DNA-Schäden und chromosomalen Aberrationen begrenzt wird. Die ERCC1-Aktivität ist eng mit zellulären Antworten auf UV-induzierte Photoprodukte und eine Reihe voluminöser Addukte verknüpft, mit nachgelagerten Auswirkungen auf Zellzyklusprogression und Apoptosesignale. Eine fehlregulierte, ERCC1-vermittelte Reparaturkapazität wird mit veränderten Phänotypen der genomischen Stabilität in Verbindung gebracht und wird häufig in Studien zu Netzwerken der DNA-Schadensantwort und zu Mutationsprozessen untersucht.
ERCC1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ERCC1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ERCC1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ERCC1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ERCC1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.