ErbB2/HER2CRISPR激活质粒(h): sc-400138-ACT

ERBB2 编码 ErbB2/HER2，是 ERBB 受体酪氨酸激酶家族成员，常作为 EGFR/ERBB3 的优先异源二聚化伙伴，从而放大由配体驱动的信号传导。含 HER2 的二聚体可激活 PI3K–AKT–mTOR 和 RAS–RAF–MEK–ERK 级联通路，将细胞外刺激与增殖、生存、代谢重塑以及细胞周期推进相连接。ERBB2 的表达失调或拷贝数改变会扰动受体转运与反馈调控，进而改变网络信号阈值并重塑转录程序。因此，ERBB2 被广泛用于研究致癌信号生物学、受体间串扰，以及人类疾病模型中通路依赖性的机制。

ErbB2/HER2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ERBB2的表达。

ErbB2/HER2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ERBB2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ERBB2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性ErbB2/HER2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ERBB2位点，并能够研究内源性位点上依赖于ErbB2/HER2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ERBB2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ErbB2/HER2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。