Plasmide Double Nickase (m) EPAS-1/HIF-2 alpha: sc-420183-NIC

Epas1 code pour EPAS-1/HIF-2α, un facteur de transcription sensible à l’oxygène qui forme un hétérodimère avec ARNT afin de coordonner l’expression de gènes répondant à l’hypoxie. En conditions de faible tension en oxygène, EPAS-1/HIF-2α s’accumule et déclenche des programmes associés à l’angiogenèse, à l’érythropoïèse, au métabolisme cellulaire et à des phénotypes de type « stem », via la signalisation HIF et des interactions avec les voies du VEGF, de l’EPO et de la glycolyse. Dans les modèles murins, l’activité d’Epas1 est centrale pour le développement vasculaire et l’adaptation physiologique à l’hypoxie, avec une pertinence large pour le remodelage induit par l’hypoxie dans les tumeurs, les modèles de lésions ischémiques et les microenvironnements inflammatoires. Une signalisation EPAS-1/HIF-2α dérégulée est fréquemment utilisée comme point d’entrée mécanistique pour étudier la détection de l’oxygène, le contrôle transcriptionnel et la reprogrammation métabolique.

EPAS-1/HIF-2 alpha Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Epas1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Epas1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Epas1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Epas1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.