Plasmide Double Nickase (h) Epac: sc-401807-NIC

Le gène humain **RAPGEF3** code **Epac** (exchange protein directly activated by cAMP), un facteur d’échange de nucléotides guaniniques qui active préférentiellement **Rap1** et **Rap2** afin de coupler les signaux **AMPc** à des réponses dépendantes des petites GTPases. Epac régule l’adhérence médiée par les intégrines, la fonction de barrière endothéliale, le trafic vésiculaire et le remodelage des jonctions cellulaires, en intégrant les entrées issues de la signalisation des GPCR aux dynamiques du cytosquelette et des membranes. Par le contrôle, via Rap, de nœuds de signalisation liés à **MAPK** et **PI3K**, **RAPGEF3** influence la prolifération, la migration et la sécrétion dans de multiples types cellulaires. Une dérégulation de la signalisation **AMPc–Epac–Rap** a été impliquée dans des phénotypes cardiovasculaires et métaboliques et est étudiée dans des contextes incluant l’inflammation, la fibrose et des changements associés au cancer touchant l’adhérence et l’invasivité.

Epac Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAPGEF3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAPGEF3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAPGEF3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAPGEF3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.