Emx2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420170-ACT

Emx2 codifica um fator de transcrição do tipo homeobox que ajuda a estabelecer a identidade do telencéfalo dorsal e a arealização cortical durante a embriogênese do camundongo, coordenando a proliferação de progenitores, a diferenciação neuronal e o padrão regional. Atua em redes regulatórias gênicas que integram sinais de morfógenos e fatores de crescimento, incluindo interações com as vias de sinalização WNT/β-catenina, FGF e SHH para moldar o desenvolvimento do prosencéfalo e a formação do limite mesencéfalo–rombencéfalo. Em tecidos adultos, Emx2 contribui para a dinâmica de células-tronco neurais e para a especificação de circuitos, relacionando sua dosagem a fenótipos do neurodesenvolvimento e a alterações na organização cortical. A expressão desregulada de EMX2 tem sido associada a malformações cerebrais do desenvolvimento e tem sido estudada no contexto da biologia tumoral e de programas de linhagem epitelial, o que a torna relevante para estudos mecanísticos de controle transcricional e destino celular.

Emx2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Emx2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Emx2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Emx2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Emx2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Emx2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Emx2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Emx2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Emx2 em células tumorais com expressão de Emx2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.