Elongin A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404668

Descripción general

ELOA codifica Elongin A, un componente central del complejo de elongación transcripcional Elongin que aumenta la procesividad de la ARN polimerasa II y ayuda a coordinar la síntesis productiva de ARNm. Elongin A también participa en ensamblajes de ligasas de ubiquitina acopladas a la transcripción, vinculando el control de la elongación con el recambio proteico y las respuestas al estrés celular. A través de estas funciones, ELOA influye en programas de expresión génica que regulan la proliferación, las respuestas al daño del ADN y la adaptación a condiciones de estrés proteotóxico. La desregulación de la elongación transcripcional y de la regulación mediada por ubiquitina son características recurrentes en el cáncer y en fenotipos del neurodesarrollo, lo que convierte a ELOA en un nodo útil para estudios mecanísticos de estas vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Elongin A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ELOA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ELOA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ELOA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Elongin A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ELOA para la investigación de la señalización de Elongin A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ELOA críticos para la función de Elongin A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ELOA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Elongin A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Elongin A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ELOA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Elongin A (h) y el plásmido HDR Elongin A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ELOA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ELOA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.