E2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423303

概要

Tcf3は、E2A塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）転写因子をコードしており、とりわけ造血系およびリンパ系のコンパートメントにおける系譜決定と分化プログラムの主要な制御因子である。E2Aは二量体を形成してE-boxモチーフに結合し、細胞周期制御、アポトーシス、発生タイミングに関わる遺伝子ネットワークを制御する。また、Notch、Wnt/βカテニン、TGF-βシグナル伝達の文脈とも機能的に交差する。マウスモデルでは、Tcf3活性の変化がB細胞およびT細胞の発生を攪乱し、幹／前駆細胞の維持に影響する転写状態を再編成し得る。E2A依存的な転写回路の破綻は、がん原性転写因子ネットワークや免疫細胞成熟異常の文脈でしばしば研究されている。

E2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTcf3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tcf3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tcf3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、E2Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、E2Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tcf3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• E2Aの機能に不可欠なTcf3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tcf3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• E2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびE2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tcf3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  E2A HDRプラスミド（m）および E2A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTcf3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTcf3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。