Plasmide CRISPR d'Activation (h) Dyskerin: sc-401278-ACT

Le gène humain **DKC1** code la dyskérine, une protéine nucléolaire essentielle qui stabilise le complexe RNP nucléolaire H/ACA et catalyse la pseudouridylation des ARNr et des snARN, soutenant la biogenèse des ribosomes et la fidélité de l’épissage du pré‑ARNm. La dyskérine s’associe également à l’holoenzyme télomérase en se liant au composant ARN de la télomérase, contribuant ainsi au maintien des télomères et à la stabilité du génome. Par ces fonctions, **DKC1** intègre le traitement des ARN au contrôle du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et à la protéostasie en conditions de stress prolifératif. La dérégulation ou les mutations de **DKC1** sont liées à des troubles de la biologie des télomères et à une altération de l’homéostasie hématopoïétique et épithéliale, ce qui en fait une cible clé pour les études mécanistiques de l’assemblage des ribonucléoprotéines et du fonctionnement du nucléole.

Dyskerin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DKC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dyskerin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DKC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DKC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dyskerin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DKC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dyskerin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dyskerin dans les cellules tumorales présentant une expression de DKC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.