Plasmide CRISPR d'Activation (h) Dyrk2: sc-403999-ACT

DYRK2 code la kinase 2 à double spécificité régulée par phosphorylation sur tyrosine (Dyrk2), une kinase sérine/thréonine qui module la stabilité des protéines et la progression du cycle cellulaire via des voies de signalisation dépendantes de la phosphorylation. Dyrk2 a été associée à la régulation des voies ubiquitine–protéasome, notamment au contrôle de substrats impliqués dans les réponses aux dommages de l’ADN et dans des programmes transcriptionnels d’adaptation au stress. En influençant le contrôle des points de contrôle (checkpoints), la signalisation liée à l’apoptose et la protéostasie, l’activité de DYRK2 peut façonner les phénotypes de prolifération et de survie cellulaires. Une expression ou une signalisation de DYRK2 dérégulée a été associée à des altérations du contrôle de la croissance et des processus de maintenance du génome, pertinents pour la biologie du cancer et d’autres troubles prolifératifs.

Dyrk2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DYRK2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dyrk2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DYRK2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DYRK2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dyrk2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DYRK2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dyrk2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dyrk2 dans les cellules tumorales présentant une expression de DYRK2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.