Deltex-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420429

Descripción general

Dtx1 codifica Deltex-1, una ligasa E3 de ubiquitina que actúa como modulador dependiente del contexto de la señalización de Notch al influir en los complejos de señalización proximales al receptor y en el recambio de los componentes de la vía. Mediante la regulación dependiente de ubiquitina, Deltex-1 puede moldear las salidas transcripcionales que afectan las decisiones de destino celular, los programas de diferenciación y la homeostasis de las células inmunitarias en modelos murinos. La actividad de Dtx1 se ha vinculado a vías que controlan la proteostasis y la transducción de señales, incluida la interacción cruzada con programas inflamatorios asociados a NF-κB en determinados contextos celulares. La desregulación de la señalización Notch/ubiquitina en la que participa Deltex-1 se ha estudiado en disfunción inmunitaria y procesos oncogénicos, lo que convierte a Dtx1 en un nodo útil para el análisis mecanístico de fenotipos dependientes de la vía.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Deltex-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Dtx1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Dtx1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Dtx1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Deltex-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Dtx1 para la investigación de la señalización de Deltex-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Dtx1 críticos para la función de Deltex-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Dtx1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Deltex-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Deltex-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Dtx1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Deltex-1 (m) y el plásmido HDR Deltex-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Dtx1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Dtx1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.