Dectin-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417053-ACT

Das humane Gen **CLEC7A** kodiert **Dectin-1**, einen C‑Typ-Lektinrezeptor, der vor allem von myeloischen Zellen exprimiert wird und **β‑Glucane** in Pilzzellwänden sowie ausgewählte endogene Liganden erkennt. Nach Ligandenbindung signalisiert Dectin-1 über ein **ITAM‑ähnliches Motiv** zur Aktivierung von **SYK**, **CARD9–BCL10–MALT1** sowie der **NF‑κB‑** und **MAPK‑Signalwege** und koordiniert damit Phagozytose, oxidativen Burst, Zytokinproduktion und inflammasomassoziierte Antworten. Dieser Rezeptor prägt außerdem die wechselseitige Kommunikation mit **Toll‑like‑Rezeptoren** und beeinflusst die Antigenpräsentation sowie eine **Th17‑gerichtete** angeboren‑adaptive Immunkommunikation. Eine veränderte Aktivität von **CLEC7A/Dectin-1** wurde mit einer erhöhten Anfälligkeit für Pilzinfektionen, fehlregulierter inflammatorischer Signalgebung und Tumor‑/Myeloid‑Mikroumgebungsphänotypen in Verbindung gebracht, die für Immunologie und Wirt‑Pathogen‑Forschung relevant sind.

Dectin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CLEC7A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Dectin-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CLEC7A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CLEC7A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Dectin-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CLEC7A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Dectin-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Dectin-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CLEC7A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.