DDR2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400414-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DDR2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DDR2 Double-Nickase-Plasmid (h) und DDR2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DDR2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DDR2: sc-81707
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DDR2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400414-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DDR2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400414-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Discoidin-Domänen-Rezeptor 2 (DDR2) ist eine durch Kollagen aktivierte Rezeptor-Tyrosinkinase, die die Wahrnehmung der extrazellulären Matrix mit intrazellulären Signalwegen koppelt, welche Zelladhäsion, Migration, Proliferation und Matrix-Remodelling steuern. Nach Bindung an fibrilläre Kollagene autophosphoryliert DDR2 und aktiviert Signalwege wie MAPK/ERK, PI3K–AKT, SRC-Familien-Signale sowie Regulatoren des Zytoskeletts; dadurch beeinflusst es epithelium-mesenchymale Transitionen und Stromainteraktionen. Die DDR2-Aktivität ist eng mit der Homöostase des Bindegewebes und dem Kollagenumsatz verknüpft, und eine veränderte DDR2-Signalgebung wurde mit fibrosebedingtem Remodelling und der Dynamik des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht. Als Zielstruktur des humanen DDR2 wird es häufig in Modellen zur extrazellulärmatrixgetriebenen Signalübertragung, zum invasiven Verhalten und zum Cross-Talk von Rezeptor-Tyrosinkinasen untersucht.
DDR2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DDR2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DDR2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DDR2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DDR2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.