DDIT3/CHOP/GADD153 Plasmide Double Nickase (h): sc-400051-NIC

DDIT3 codifica il fattore di trascrizione CHOP (GADD153), una proteina bZIP inducibile dallo stress che forma eterodimeri con membri della famiglia C/EBP per riprogrammare l’espressione genica durante lo stress cellulare. CHOP è un effettore centrale della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR), integrando la segnalazione PERK–eIF2α–ATF4 per regolare apoptosi, controllo redox e proteostasi in condizioni di stress del reticolo endoplasmatico. Oltre allo stress del RE, DDIT3 partecipa a vie della risposta integrata allo stress collegate a privazione di nutrienti, stress ossidativo e segnali infiammatori, influenzando le decisioni di destino cellulare e i programmi di differenziamento. Un’attività deregolata di CHOP è implicata in disfunzioni metaboliche, modelli di neurodegenerazione, danno tissutale infiammatorio e contesti oncogenici, inclusa la fusione FUS-DDIT3 associata al liposarcoma mixoide, rendendo DDIT3 un nodo chiave per studi meccanicistici delle reti trascrizionali di adattamento allo stress.

DDIT3/CHOP/GADD153 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DDIT3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DDIT3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DDIT3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DDIT3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.