DARPP-32 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422380

Descripción general

Ppp1r1b codifica DARPP-32 (fosfoproteína regulada por dopamina y AMPc, 32 kDa), un integrador clave de la señalización dopaminérgica y glutamatérgica en las neuronas espinosas medianas del estriado. Mediante un cambio funcional dependiente de la fosforilación, DARPP-32 modula la actividad de la fosfatasa de proteínas 1 (PP1) y conecta la señalización AMPc/PKA con la regulación aguas abajo de la plasticidad sináptica, la función de los canales iónicos y la señalización de receptores de neurotransmisores. Este nodo se cruza con vías que gobiernan el aprendizaje por recompensa, el control motor y las respuestas transcripcionales a neuromoduladores, lo que convierte a Ppp1r1b en un marcador de lectura frecuente en estudios de los circuitos de los ganglios basales. Las alteraciones en la señalización de DARPP-32 se han asociado con mecanismos de enfermedades neuropsiquiátricas y neurodegenerativas, incluida la desregulación de la señalización dopaminérgica, la plasticidad maladaptativa y fenotipos conductuales relacionados con el estrés en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DARPP-32 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ppp1r1b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ppp1r1b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ppp1r1b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DARPP-32.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ppp1r1b para la investigación de la señalización de DARPP-32, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ppp1r1b críticos para la función de DARPP-32
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ppp1r1b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DARPP-32 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido DARPP-32 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ppp1r1b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DARPP-32 (m) y el plásmido HDR DARPP-32 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ppp1r1b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ppp1r1b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.