Plasmide CRISPR d'Activation (h) DAGLβ: sc-406084-ACT

DAGLB code la lipase β du diacylglycérol (DAGLβ), une hydrolase à sérine qui convertit le diacylglycérol en 2‑arachidonoylglycérol (2‑AG), un important médiateur lipidique endocannabinoïde. En contrôlant la disponibilité du 2‑AG, la DAGLβ contribue à la signalisation des récepteurs cannabinoïdes et coordonne le flux de seconds messagers lipidiques avec les voies inflammatoires et métaboliques. L’activité de la DAGLβ est fréquemment étudiée dans l’activation des cellules immunitaires, la signalisation lipidique des macrophages et la régulation de la production de médiateurs dérivés de l’acide arachidonique. Des réseaux endocannabinoïdes et eicosanoïdes dérégulés impliquant la DAGLβ ont été associés à des états inflammatoires, au dialogue neuro‑immunitaire et à des phénotypes cardiométaboliques, ce qui soutient des recherches mécanistiques sur la signalisation lipidique associée aux maladies.

DAGLβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DAGLB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DAGLβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DAGLB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DAGLB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DAGLβ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DAGLB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DAGLβ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DAGLβ dans les cellules tumorales présentant une expression de DAGLB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.