DAGLα CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402826-ACT

DAGLA はジアシルグリセロールリパーゼα（DAGLα）をコードしており、これは膜結合性のセリン加水分解酵素で、sn-1-アシル-2-アラキドノイルグリセロールを主要な内因性カンナビノイド脂質メディエーターである 2-アラキドノイルグリセロール（2-AG）へと変換します。シナプスやその他のシグナル伝達マイクロドメインにおける 2-AG 産生を制御することで、DAGLα は CB1/CB2 受容体を介した逆行性カンナビノイドシグナル伝達を調節し、ホスホイノシチドおよびジアシルグリセロール駆動性経路と統合されます。この酵素は神経細胞の興奮性、シナプス可塑性、神経炎症性シグナル伝達に影響し、内因性カンナビノイドのトーン（基調）の変化は複数の神経疾患・神経精神疾患の文脈と関連づけられています。DAGLα 活性はアラキドン酸由来の脂質ネットワークとも交差しており、そのため DAGLA は脂質シグナル伝達の恒常性や刺激に連動したシグナル伝達を研究するうえで有用な結節点となります。

DAGLα CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DAGLAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DAGLα CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DAGLA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDAGLA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DAGLαの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDAGLA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDAGLα依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDAGLA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDAGLα経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。