Plásmido Doble Nickase (h) D1DR/Dopamine Receptor D1: sc-400532-NIC

DRD1 codifica el receptor de dopamina D1 (D1DR), un receptor acoplado a proteína G que se acopla principalmente a Gαs/olf para estimular la adenilato ciclasa, elevar el AMPc y activar la señalización dependiente de PKA. La señalización de D1DR modula la excitabilidad neuronal y la plasticidad sináptica mediante la regulación de canales iónicos, la transcripción mediada por CREB y la interacción con las vías MAPK/ERK. En el sistema nervioso central, DRD1 es un componente clave de la neurotransmisión dopaminérgica en circuitos estriatales y corticales, influyendo en el control motor, el aprendizaje por recompensa y la cognición. La desregulación de la señalización de DRD1 y de la expresión del receptor se investiga con frecuencia en el contexto de mecanismos de enfermedades neuropsiquiátricas y neurodegenerativas, como la enfermedad de Parkinson y la esquizofrenia, así como de adaptaciones relacionadas con el consumo de sustancias.

D1DR/Dopamine Receptor D1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DRD1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DRD1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DRD1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DRD1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.