Particules Lentivirales d'Activation (h) CYP4F8: sc-411598-LAC

CYP4F8 code une monooxygénase du cytochrome P450 qui catalyse l’oxydation, dépendante du NADPH, de lipides endogènes et de xénobiotiques, contribuant ainsi à l’homéostasie cellulaire des médiateurs lipidiques. En tant que membre de la famille CYP4, CYP4F8 participe à des voies de métabolisme oxydatif qui modulent les processus inflammatoires et de signalisation via l’hydroxylation d’acides gras et de substrats eicosanoïdes apparentés. Les variations de l’activité des gènes CYP4F peuvent influencer les concentrations locales de médiateurs lipidiques bioactifs, reliant cet axe à des travaux portant sur la biologie de l’inflammation, la fonction épithéliale et les tissus hormono-dépendants. Par conséquent, CYP4F8 est fréquemment étudié dans des approches mécanistiques axées sur la régulation lipidomique, les réponses de détoxification et les changements d’expression des enzymes métaboliques associés aux maladies.

Les particules d'activation lentivirales CYP4F8 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CYP4F8 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CYP4F8 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CYP4F8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CYP4F8. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CYP4F8 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.