Particules Lentivirales d'Activation (m) CYP4A10: sc-419927-LAC

Le gène murin Cyp4a10 code la CYP4A10, une monooxygénase du cytochrome P450 qui catalyse l’ω‑hydroxylation d’acides gras à chaîne moyenne et longue, contribuant à la formation du 20‑HETE et d’eicosanoïdes apparentés. Par ces réactions, la CYP4A10 participe à des programmes d’oxydation lipidique et s’inscrit dans des réseaux métaboliques régulés par les PPAR, qui influencent le maniement tubulaire rénal, le tonus vasculaire et la signalisation inflammatoire. Une activité modifiée de Cyp4a10 a été associée à des changements de la régulation de la pression artérielle et à la susceptibilité au stress métabolique dans des modèles murins, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la physiologie cardiométabolique et rénale. Son expression répond à des signaux alimentaires et hormonaux, ce qui étaye son utilisation pour la cartographie des voies du métabolisme des xénobiotiques et des lipides endogènes.

Les particules d'activation lentivirales CYP4A10 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Cyp4a10 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CYP4A10 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Cyp4a10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CYP4A10. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Cyp4a10 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.