CYP2S1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405785

Panoramica

CYP2S1 codifica per il citocromo P450 2S1, una monoossigenasi extraepatica che catalizza il metabolismo ossidativo di lipidi endogeni e di substrati xenobiotici. È stato collegato alla segnalazione dell’acido arachidonico e degli eicosanoidi, inclusa l’ossigenazione di mediatori derivati dagli acidi grassi in grado di influenzare programmi infiammatori e di risposta allo stress. L’espressione di CYP2S1 è arricchita nei tessuti epiteliali ed è regolata da segnali ambientali e ossidativi, a supporto di ruoli nella biologia delle barriere e nella difesa chimica. Un’attività o un’espressione deregolata di CYP2S1 è stata associata ad alterazioni nella gestione degli xenobiotici e nell’equilibrio redox in contesti quali l’infiammazione e la biologia del cancro, rendendolo rilevante per studi meccanicistici di fenotipi guidati dal metabolismo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP2S1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CYP2S1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CYP2S1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CYP2S1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CYP2S1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CYP2S1 per lo studio della segnalazione di CYP2S1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CYP2S1 critici per la funzione di CYP2S1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CYP2S1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CYP2S1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CYP2S1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CYP2S1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CYP2S1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CYP2S1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CYP2S1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CYP2S1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.