Plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP2S1 (h): sc-405785

Présentation

CYP2S1 code le cytochrome P450 2S1, une monooxygénase extra-hépatique qui catalyse le métabolisme oxydatif de lipides endogènes et de substrats xénobiotiques. Elle a été associée à la signalisation de l’acide arachidonique et des eicosanoïdes, notamment via l’oxygénation de médiateurs dérivés des acides gras pouvant moduler les programmes inflammatoires et de réponse au stress. L’expression de CYP2S1 est enrichie dans les tissus épithéliaux et régulée par des signaux environnementaux et oxydatifs, ce qui soutient des rôles dans la biologie des barrières et la défense chimique. Une activité ou une expression dérégulée de CYP2S1 a été associée à des altérations de la prise en charge des xénobiotiques et de l’équilibre rédox dans des contextes tels que l’inflammation et la biologie des cancers, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de phénotypes pilotés par le métabolisme.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP2S1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CYP2S1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CYP2S1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CYP2S1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CYP2S1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CYP2S1 pour l'étude de la signalisation de CYP2S1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CYP2S1 essentiels à la fonction de CYP2S1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CYP2S1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CYP2S1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CYP2S1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CYP2S1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CYP2S1 plasmide HDR (h) et le CYP2S1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CYP2S1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CYP2S1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.