CYP24 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401233-ACT

CYP24A1 codifica a enzima mitocondrial do citocromo P450 CYP24 (25-hidroxivitamina D3 24-hidroxilase), um regulador catabólico essencial do metabolismo da vitamina D. A CYP24 inicia a oxidação da 1,25-di-hidroxivitamina D3 e da 25-hidroxivitamina D3, moldando programas transcricionais dependentes do VDR que controlam a homeostase de cálcio/fosfato, a diferenciação celular e a sinalização imune. Por meio da modulação da disponibilidade de calcitriol, a CYP24A1 influencia redes gênicas responsivas a hormônios esteroides e processos redox mitocondriais. A expressão ou atividade desregulada de CYP24A1 tem sido associada a alterações na sinalização da vitamina D na biologia do câncer, em distúrbios metabólicos e em fenótipos inflamatórios, tornando-a um nó útil para estudos mecanísticos da regulação da via do VDR.

CYP24 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CYP24A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYP24 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CYP24A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CYP24A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYP24. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CYP24A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYP24 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYP24 em células tumorais com expressão de CYP24A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.