Plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP1A2 (h): sc-401178

Présentation

CYP1A2 code une monooxygénase microsomale du cytochrome P450 qui catalyse le métabolisme oxydatif d’une grande diversité de xénobiotiques et de substrats endogènes, contribuant à l’élimination hépatique des médicaments et à la détoxification chimique. Sa transcription est régulée par des voies de détection des xénobiotiques, notamment la signalisation du récepteur des hydrocarbures aromatiques (AHR), et son activité enzymatique s’inscrit dans l’homéostasie rédox via le couplage avec la NADPH–P450 réductase. Les variations génétiques et environnementales de CYP1A2 peuvent modifier la capacité métabolique, influençant la susceptibilité aux effets indésirables médicamenteux et la sensibilité différentielle aux procarcinogènes. CYP1A2 est donc fréquemment étudié en pharmacogénomique, en toxicologie et dans des modèles de fonction métabolique spécifique du foie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP1A2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CYP1A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CYP1A2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CYP1A2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CYP1A2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CYP1A2 pour l'étude de la signalisation de CYP1A2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CYP1A2 essentiels à la fonction de CYP1A2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CYP1A2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CYP1A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CYP1A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CYP1A2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CYP1A2 plasmide HDR (h) et le CYP1A2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CYP1A2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CYP1A2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.