Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CYP1A2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401178
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CYP1A2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CYP1A2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CYP1A2 Antibody (3B8C1): sc-53614
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CYP1A2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401178 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CYP1A2 codifica una monoossigenasi microsomiale del citocromo P450 che catalizza il metabolismo ossidativo di diversi xenobiotici e substrati endogeni, contribuendo alla clearance epatica dei farmaci e alla detossificazione chimica. La sua trascrizione è regolata da vie di sensing degli xenobiotici, inclusa la segnalazione del recettore degli idrocarburi arilici (AHR), e la sua attività enzimatica si interseca con l’omeostasi redox tramite l’accoppiamento con la NADPH–P450 reduttasi. La variabilità genetica e ambientale di CYP1A2 può modificare la capacità metabolica, influenzando la suscettibilità a reazioni avverse ai farmaci e la diversa sensibilità ai procarcinogeni. Per questo motivo, CYP1A2 è spesso studiato in farmacogenomica, tossicologia e in modelli della funzione metabolica specifica del fegato.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP1A2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CYP1A2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CYP1A2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CYP1A2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CYP1A2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CYP1A2 per lo studio della segnalazione di CYP1A2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CYP1A2 critici per la funzione di CYP1A2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CYP1A2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CYP1A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CYP1A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CYP1A2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CYP1A2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CYP1A2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CYP1A2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CYP1A2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.