Plasmide Double Nickase (h) cyclin D1: sc-400047-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) cyclin D1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide cyclin D1 Double Nickase (h) et le plasmide cyclin D1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CCND1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: cyclin D1 Antibody (A-12): sc-8396
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) cyclin D1 | sc-400047-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) cyclin D1 | sc-400047-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCND1 code la cycline D1, un régulateur central de la transition G1/S du cycle cellulaire qui s’associe à CDK4/6 pour phosphoryler RB1 et favoriser la transcription dépendante d’E2F. La cycline D1 intègre les signaux mitogènes issus de voies telles que RAS–MAPK et PI3K–AKT afin de coupler les signaux extracellulaires à l’entrée en cycle, à la prolifération et à la différenciation. Une expression dérégulée de CCND1 ou un gain du nombre de copies est fréquemment associé à un contrôle anormal des points de contrôle, à des programmes transcriptionnels modifiés et à une instabilité génomique dans de nombreux contextes tumoraux, ce qui en fait une cible largement étudiée au sein des réseaux de signalisation du cycle cellulaire et de l’oncogenèse.
cyclin D1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CCND1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CCND1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CCND1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CCND1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.