CSP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403622
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CSP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CSP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CSP Anticuerpo (H-3): sc-137128
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CSP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403622 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
DNAJC5 codifica la proteína de cadena de cisteínas (CSP), un cocochaperón con dominio J palmitoilado, enriquecido en las vesículas sinápticas, donde coordina el control de calidad proteico dependiente de Hsc70 en las terminales presinápticas. CSP favorece una exocitosis eficiente de las vesículas sinápticas al estabilizar componentes de la maquinaria SNARE y otras proteínas del tráfico vesicular, ayudando así a mantener la neurotransmisión bajo condiciones de alta actividad. A través de sus funciones en la proteostasis mediada por chaperonas, el tráfico de membranas y la homeostasis sináptica, la alteración de la función de DNAJC5/CSP se asocia con fenotipos neurodegenerativos y con una mayor vulnerabilidad neuronal en trastornos caracterizados por un mantenimiento sináptico deficiente.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CSP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DNAJC5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DNAJC5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DNAJC5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CSP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DNAJC5 para la investigación de la señalización de CSP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de DNAJC5 críticos para la función de CSP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DNAJC5 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CSP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CSP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DNAJC5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CSP (h) y el plásmido HDR CSP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DNAJC5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DNAJC5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.