CRX CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419817

概要

Crx は、マウス網膜における光受容体の分化と維持を統括的に制御する主要な転写因子である cone-rod homeobox（CRX）をコードする。CRX はシス制御エレメントに結合して、光情報伝達、外節形成、シナプス機能に必要な遺伝子の発現を駆動し、他の網膜系譜因子とともに転写ネットワークを統合する。CRX 依存的な遺伝子プログラムが破綻すると、杆体および錐体の成熟と生存が損なわれ、この経路が遺伝性網膜変性の表現型と関連することが示される。そのため、Crx は網膜発生の機構、光受容体遺伝子発現制御、ならびに視覚系疾患モデルにおける遺伝子型—表現型相関の解明に向けて広く研究されている。

CRX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCrx遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Crx内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Crxのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CRXタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CRXシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Crx欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CRXの機能に不可欠なCrxエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Crxゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CRX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCRX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Crx遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CRX HDRプラスミド（m）および CRX HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCrxホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCrx標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。