Partículas Lentivirales de Activación (h) connexin 43: sc-400241-LAC

GJA1 codifica la conexina 43 (Cx43), una proteína principal de las uniones comunicantes (gap junctions) que se ensambla en conexones para permitir el intercambio intercelular directo de iones y pequeños metabolitos, coordinando el acoplamiento eléctrico y metabólico entre tejidos. Cx43 regula la señalización dependiente de contacto en procesos que incluyen la propagación del impulso cardíaco, la reparación de heridas y la homeostasis tisular, con un control dinámico mediante fosforilación, tráfico intracelular y recambio. Más allá de su función como canal, la conexina 43 influye en la organización del citoesqueleto y en cascadas de señalización como MAPK/ERK y PKC, que modulan la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés. La expresión desregulada de GJA1 o la remodelación de los canales de conexina 43 se han asociado con fenotipos arritmogénicos, alteración de programas de barrera y reparación, y cambios en la comunicación tumor–estroma en múltiples cánceres.

Las partículas de activación lentiviral connexin 43 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de GJA1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral connexin 43 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción GJA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de connexin 43. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo GJA1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.