Partículas Lentivirales de Activación (m) Conductin: sc-419278-LAC

El gen murino Axin2 codifica Conductina, una proteína andamio que actúa como un regulador clave de retroalimentación negativa de la señalización canónica Wnt/β-catenina. Conductina favorece el recambio de β-catenina al coordinar los componentes del complejo de destrucción, influyendo así en los programas transcripcionales que controlan el mantenimiento de células madre, la proliferación y la diferenciación. Como gen diana directo de Wnt, la expresión de Axin2 se utiliza ampliamente como lectura de la actividad de la vía y de la dinámica oscilatoria de la señalización durante el desarrollo y la homeostasis tisular. La señalización Wnt desregulada vinculada a AXIN2/Conductina está implicada en la tumorigenesis, en defectos del patrón esquelético y craneofacial, y en la remodelación del epitelio intestinal, por lo que es relevante para modelos de biología del cáncer y procesos regenerativos.

Las partículas de activación lentiviral Conductin (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Axin2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Conductin (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Axin2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Conductin. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Axin2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.