Clusterin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419695

Panoramica

Mouse Clu codifica la clusterina, una glicoproteina secreta e associata alla matrice extracellulare che funge da chaperone molecolare e fattore legante i lipidi, implicata nella proteostasi, nella regolazione del complemento e nella rimozione dei detriti cellulari. La clusterina partecipa a processi responsivi allo stress, tra cui la modulazione dell’apoptosi, l’adattamento allo stress ossidativo e il rimodellamento delle membrane, ed è stata collegata a vie che governano l’infiammazione e l’omeostasi extracellulare. Nel sistema nervoso e in altri tessuti, CLU è spesso studiata per i suoi ruoli nella dinamica dell’aggregazione proteica e nella segnalazione gliale o immunitaria. Un’alterata espressione o funzione di CLU è stata associata a neurodegenerazione, stress metabolico e biologia tumorale, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici sul danno tissutale e sugli stati infiammatori cronici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Clusterin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Clu in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Clu insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Clu a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Clusterin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Clu per lo studio della segnalazione di Clusterin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Clu critici per la funzione di Clusterin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Clu per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Clusterin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Clusterin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Clu. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Clusterin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Clusterin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Clu per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Clu definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.